Duke je utjelovljenje brojnih vrijednosti američke vojske. On je tip koji je nevjerojatno odan svojim prijateljima i sve bi učinio za njih. Sve bi učinio i za svoju državu. On je rođeni vođa. Međutim, Duke nije jednodimenzionalni borbeni stroj. On je čovjek od malo riječi, a ipak je vrlo složen. Jako voli svoje prijatelje i to se ne boji pokazati. Publika na neki način proživljava cijelu priču kroz Dukea jer je on glavni lik postrojbe G. I. Joe. Kada su tražili glumca koji će obući Dukeove čizme, filmaši su se obratili zvijezdi u usponu Channingu Tatumu, koji je zbog svog dobrog izgleda i stasa bio savršen za ulogu junačkog G. I. Joe vojnika. Mladi glavni glumac, koji je publici poznat po ulozi u filmu 'Step up', bio je iznenađen kada je dobio ulogu svog života. 'Nikad prije nisam radio nešto slično ovome', kaže on. 'Osim kada sam imao četiri godine i posvuda trčkarao sa svojom figuricom G. I. Joe. Katkad bi mi na setu sinulo da je potpuno nestvarno to gdje se nalazim i ono što glumim. Nevjerojatno!'

Postrojbu G. I. Joe s Dukeom upoznaje Ripcord, njegov ironični kolega iz specijalnih postrojbi u kojima su zajedno proveli 10 godina. Ripcord je vojnik kojemu bi Duke povjerio svoj život. Iako ponekad zbija šale, on će vas iznenaditi. On zna biti opušten i zabavan, ali kada zagusti, on je tip kojega želite kraj sebe. Ripcord je važan lik s važnim vještinama. On igra važnu ulogu u konačnom sukobu između postrojbe G. I. Joe i organizacije Kobra. Odnos između Dukea i Ripcorda posebno je zanimljiv. Njihovo je prijateljstvo slično onome koje su dijelili likovi iz filma 'Smrtonosno oružje'. Nalaze se usred pucnjave, a svađaju se na zabavan način. Tako vidite ljudske osobine i karakter tih likova. Za tu ulogu morali su pronaći glumca koji, osim što zna biti komičan, mora znati i glumiti. Wayans je s devetero braće i sestara odrastao u siromaštvu. Kada je gledao prijatelje kako se igraju s akcijskim figuricama, on i njegov brat morali su improvizirati: 'Igrali smo se sa žoharima koje smo obojali u zeleno. To su bile naše akcijske figurice G. I. Joe', kaže on. 'Želio sam se igrati s njima, tako da je sada zbilja zabavno biti G. I. Joe vojnik.' Wayans kaže da u stvarnosti nikad ne bi htio sudjelovati u borbama koje su vodili na platnu: 'Rat je strašna stvar. Vojnici bi trebali dobivati 20 milijuna dolara po borbi. Blagoslovljeni oni koji se bore za našu slobodu! Ripcord voli opasnosti, ali ja bih se sigurno sakrio u nekome jarku i ljudima slao mailove.'

Obožavatelji su jedva dočekali lika po imenu Snake Eyes, tajanstvenog i smrtonosnog ninju postrojbe G. I. Joe. On je vjerojatno najveća legenda u svijetu G.I. Joe likova. Glumac koji ga glumi, Škot Ray Park, također je legenda, a najpoznatiji je po ulozi Dartha Maula u filmu 'Ratovi zvijezda: fantomska prijetnja'. Park je od djetinjstva obožavatelj filmskih junaka koji su se služili borilačkim vještinama i kaže da su se on i njegov brat igrali s britanskom inačicom G. I. Joe figurice, odnosno s figuricom poznatom pod imenom Action Man. 'Imao sam figuricu od 30 cm, ogroman tenk i veliki helikopter, a on je imao figurice Snake Eyes, Storm Shadow i zapovjednika organizacije Kobra. Ja sam uvijek bio Storm Shadow jer mi se sviđala ideja o ninji koji je odjeven u bijelo', kaže on o suparniku lika Snake Eyes. Snake Eyes je tih i odlučan tip, a to ga čini ključnim članom postrojbe G. I. Joe. Baš kada ga zatrebate, on je tu. Kada svi izgube kontrolu, on je smiren. Kada su svi smireni, on je u pokretu. Poseban je i zbog svog zavjeta na šutnju.

Protuobavještajne aktivnosti za postrojbu G. I. Joe obavlja Scarlett koja je vrlo žustra i vješta s oružjem. Osim što je iznimno vješta sa svojim samostrelom, ona je pravi genij koji je iz koledža izašao u dobi od 12 godina. Scarlett je i pravi komad, a kada su tražili glumicu koja bi bila i zgodna i pametna, producenti su došli do Rachel Nichols. 'Scarlett je jedna od naše tri ljepotice', objašnjava Sommers. 'Ovaj je lik iznimno inteligentan, ali i besramno lijep, a takve mogu biti samo prave junakinje iz stripova. Rachel je morala pronaći tu ravnotežu. Film nalikuje stripu, ali u ulozi genijalca nikad ne želite nekoga tko to ne može uvjerljivo odglumiti. Scarlett je vrhunski obavještajac i vojnik. Imali smo sreće jer je Rachel vrlo inteligentna, a to se odmah vidi na platnu.'

General Hawk je autoritativni vođa postrojbe G. I. Joe koji će vam reći sve što mu je na pameti, a posebno ako vam je on zapovjednik. On je okorjeli, opasni veteran koji je prošao brojne misije i sudjelovao u brojnim akcijama. Također, on je tip koji ima vrlo jednostavan moto: 'Uništi zlikovce i drži ekipu na okupu.' Iako je njegov sin obožavatelj G. I. Joe figurica iz 80-ih, Quaid kaže: 'Dok sam odrastao, G. I. Joe figurice bile su nešto vrlo domoljubno, vrlo američki. Uvijek je bilo figurica vojnika, ali ovaj je prvi imao opremu, džipa i slične stvarčice. Svi su ga željeli. G. I. Joe figurice sada su postale međunarodne. Radi se o skupini međunarodnih elitnih vojnika koji pokušavaju održati mir.'

Od ostalih likova u postrojbi G. I. Joe tu su još Breaker, stručnjak za kominkacije, kojeg tumači pariški glumac Saïd Taghmaoui, Heavy Duty, stručnjak za teško oružje, kojeg je utjelovio britanski glumac Adewale Akinnuoye-Agbaje. U ulozi Courtney Krieger pojavljuje se manekenka Karolina Kurkova.

Postrojba G. I. Joe sastoji se od brojnih fascinantnih likova, ali zlikovci iz filma nisu ništa manje zanimljivi. Kao i u svim velikim mitovima, neprijatelje pokreću mračne sile, a svaki od njih ima pozadinsku priču koja će zaintrigirati i nove i stare obožavatelje dok otkrivaju isprepletene priče između njih i između članova postrojbe G. I. Joe.

Vođa opasne organizacije Kobra je James McCullen, a tumači ga britanski glumac Christopher Eccleston. U svojoj ekipi ima Barunicu (Sienna Miller), opasnog ninju Storm Shadowa (Byung Hun Lee) i Doktora (Joseph Gordon-Levitt).